Agentes indicadores de contaminación
Los organismos coliformes son siempre miembros
del grupo de las bacterias entéricas es decir que habitan en
el tracto intestinal de animales de sangre caliente y
personas. Su determinación es necesaria, por que
proporciona información importante sobre la fuente y el tipo de
contaminación presente.
- Un método muy utilizado para el recuento
de coliformes en agua ha sido siempre el Número Más Probable (NMP),
aunque se han ido variando los medios de cultivo, las condiciones y las
técnicas de análisis, con el objetivo de obtener cada vez mayor
sensibilidad y precisión, hasta el punto que se ha llegado a aceptar como
método estándar. Los distintos métodos de NMP para coliformes totales se
basan, en primera instancia, en una selección de los microorganismos que
producen ácido y gas a partir de lactosa a 35ºC. Por ello, el primer paso
es siempre la siembra en tubos de algún caldo lactosado, con o sin
inhibidores, con un tubo de fermentación que permite recoger el gas que
pueda producirse. A esto sigue una confirmación en un medio líquido
selectivo y/o una determinación de los coliformes fecales cuya
diferenciación se realiza con base en el hecho de que pueda producir gas
desde lactosa, en un medio apropiado cuando se incuba a 44,
°C mientras que los demás coliformes no.
- El método de
filtración por membrana para el recuento de bacterias coliformes totales y
fecales. Es un método altamente reproducible, que
puede usarse para analizar volúmenes de muestra relativamente grandes y
con el que se obtienen resultados en menor tiempo que con el NMP.
Sin embargo, no puede aplicarse a cualquier tipo de muestra y
tiene sus limitaciones. Las bacterias coliformes dan colonias oscuras con
brillo metálico en medio Endo, luego de 24 h de incubación a 35ºC. La
determinación de coliformes fecales se hace a partir de las colonias
desarrolladas en Endo o directamente incubando la membrana en medio m-FC e
incubando a 44,5ºC.
- En la detección simultánea de
coliformes totales y Escherichia coli se utiliza la prueba de sustrato
enzimático. En este caso, el grupo de coliformes
totales incluye todas las bacterias que presentan la enzima
beta-D-galactosidasa, que hidroliza un sustrato cromogénico (por ejemplo,
ONPG) liberando el cromógeno. Como E. coli se incluyen todas las bacterias
que dan positiva la reacción de coliformes totales y que tienen
actividad beta-glucuronidasa, que rompe el sustrato fluorogénico (por
ejemplo, MUG), liberando el fluorógeno. Este método permite llevar a cabo
tanto recuentos como ensayos de ausencia/presencia.
- También se usa como indicador de contaminación
fecal la presencia de Enterococcus faecalis su hábitat es el
intestino del hombre y los animales de sangre caliente, por lo tanto, son
indicadores de contaminación fecal, sobre todo en muestras de lagos,
estuarios, ríos, etc. Los métodos
estándar para su estimación: NMP y Filtración por membrana.
- Otro grupo de indicadores que ha
comenzado a utilizarse en aguas lo constituyen los colífagos, que
son bacteriófagos de coliformes, es decir, se encuentran siempre que haya
coliformes totales y fecales. De acuerdo con estudios de correlación entre
números de colifagos y coliformes en agua, se podría utilizar el índice de
colífagos como índice de calidad sanitaria del agua. Además, como son más
resistentes a la cloración que los coliformes, pueden ser mejores
indicadores de desinfección que estos últimos.
El método de cuantificación se basa en la
formación de placas de lisis. Los colífagos (bacteriófagos) infectan y se
multiplican en bacterias sensibles a ellos. Esto provoca la lisis celular o
rotura de la membrana celular de esas bacterias y
la liberación de partículas virales que infectarán las células bacterianas
adyacentes. A medida que las bacterias se vayan lisando, se formarán zonas
claras entre el crecimiento confluente de la bacteria utilizada, determinando
las conocidas como “placas de lisis”.
